傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶?jī)?nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過(guò)度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

HPT-8人飼養(yǎng)層上皮細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無(wú)菌，且須在無(wú)菌超凈工作臺(tái)中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長(zhǎng)。來(lái)源于不同動(dòng)物種類(lèi)、組織類(lèi)型的細(xì)胞，對(duì)培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對(duì)于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)起著關(guān)鍵作用。可根據(jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過(guò)短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過(guò)小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過(guò)大對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴螅瑧?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過(guò)程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

Flotillin 2： 表皮細(xì)胞表面抗原1抗體 人腸平滑肌細(xì)胞RNAHISMC miRNA5 μg

GRC-1細(xì)胞，人腎癌細(xì)胞 鼠纖維肉瘤細(xì)胞系,WEHI 164細(xì)胞 CL-0446SUP-B15(人Ph+急淋白血病細(xì)胞系)5×106cells/瓶×2 兔細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1)ELISA試劑盒 Goat Anti-Bovine IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的羊抗IgG 0.5ml

Factor IX： 9抗體 EFNA5 Others Mouse 小鼠 EFNA5 / Ephrin-A5 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

MN-h, 小鼠海馬神經(jīng)元 兔透明質(zhì)酸(HA)ELISA 試劑盒 Goat Anti-Bovine IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的羊抗IgG 0.1ml

Factor X： 10抗體 H9c2大鼠心肌細(xì)胞(ATCC來(lái)源) Rattus

TNFSF11 Others Mouse 小鼠 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 大鼠(Pepsin)ELISA 試劑盒 HL(Mouse hepatic lipase)  小鼠肝脂酶 96T

MTGR1： 髓易位基因相關(guān)蛋白1抗體 人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(懸浮生長(zhǎng))cDNAHOPC-os cDNA

L W-3A小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞 L W-3A mice subcutaneous connective tissue cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS 大鼠胃腸癌標(biāo)志物CA199ELISA 試劑盒 UK  大鼠 96T

BBS6： 巴德-畢德氏綜合征蛋白BBS6抗體 HA Others H2N2 甲型流感 H2N2 (A/Japan/305/1957) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

CL-0282HO-8910PM(人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 大鼠尾加壓素II(Urotensin II) ELISA試劑盒 VCAM-1/CD106(Human Vascuolar cell adhesion molecule 1)  人血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1 96T

HPT-8人飼養(yǎng)層上皮細(xì)胞Phospho-IRAK1 (Thr209)： 0酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0923

NIH/3T3(小鼠胚胎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人 EVI2A 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 人成骨生長(zhǎng)肽(OGP)ELISA 試劑盒 Inhibin beta A peptide 抑制素beta A抗原 0.5mg

Phospho-IRAK1 (Thr387)： 0酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體 小鼠顆粒細(xì)胞MGC

CCL1 Protein Human 重組人 I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白 人超氧化物歧化酶(SOD)ELISA 試劑盒 Inhibin beta B 抑制素βB抗原 0.5mg

IRF3： 干擾素調(diào)節(jié)因子3 0.1ml