小鼠脂蛋白α（Lp-α）ELISA試劑盒采用固相夾心法原理，其工作流程可分為五個(gè)核心階段：
?固相抗體包被?
將純化的大鼠Lp-α特異性抗體通過(guò)物理吸附作用固定在酶標(biāo)板微孔表面，形成固相捕獲抗體層?。這一步驟通常在4℃過(guò)夜完成，確保抗體充分結(jié)合。
?抗原-抗體結(jié)合?
加入待測(cè)樣本或標(biāo)準(zhǔn)品后，樣本中的Lp-α抗原與固相抗體發(fā)生特異性結(jié)合，形成"抗體-抗原"復(fù)合物。未結(jié)合的游離物質(zhì)通過(guò)洗滌步驟去除?。
?酶標(biāo)抗體識(shí)別?
加入HRP標(biāo)記的第二抗體（酶標(biāo)抗體），該抗體與Lp-α抗原的另一表位結(jié)合，完成"抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"夾心結(jié)構(gòu)構(gòu)建?。
?顯色反應(yīng)檢測(cè)?
加入TMB底物后，HRP酶催化產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，酸性終止液使顏色轉(zhuǎn)為黃色。450nm波長(zhǎng)下測(cè)定的吸光度與抗原濃度呈正相關(guān)?。
?定量分析?
通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線（通常為4-5個(gè)濃度梯度）計(jì)算樣本中Lp-α的摩爾濃度，檢測(cè)靈敏度可達(dá)pg/ml級(jí)別?。
該方法的關(guān)鍵優(yōu)勢(shì)在于雙重抗體識(shí)別機(jī)制，既保證了檢測(cè)特異性（通過(guò)兩個(gè)獨(dú)立表位識(shí)別），又顯著提高了靈敏度。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需嚴(yán)格控制洗滌步驟（推薦使用自動(dòng)洗板機(jī)?）和溫育時(shí)間（各步驟60-120分鐘?），以確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性。
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